联系电话

400-102-9559

Title
打开微信“扫一扫”
打开网页后点击屏幕
右上角“分享”按钮

蛋白质互作:串联亲和纯化(TAP-MS)

辉骏生物 2018-11-16 18:43:17

阅读(226)

点赞 (0)

技术简介:
        蛋白质互作研究按照实验目的可分为两大类,一是验证两个蛋白是否存在相互作用,二是筛选某个兴趣蛋白的互作蛋白。

        目前,常用的蛋白质互作分析技术有:免疫共沉淀(CO-IP),pull-down、串联亲和纯化法(tandem affinity purification,TAP)和基于SILAC技术的免疫共沉淀(SILAC-IP)等。

        其中CO-IP、Pull-down常被用来验证两个蛋白的相互作用;虽然CO-IP或Pull-down结合质谱的方法也可用来筛选互作蛋白,但常常会带来很多假阳性结果;因此,TAP和SILAC-IP技术在筛选互作蛋白的研究方面表现出了一定优势。

        串联亲和纯化技术 (tandem affinity purification,TAP)与COIP技术筛选互作蛋白的原理类似。不同的是TAP技术使诱饵蛋白带上了2个纯化标签,利用标签对蛋白复合物进行了两轮纯化(串联亲和纯化),使洗脱液中的非特异性蛋白降至较低水平。结合LC-MS/MS技术,分别鉴定出实验组和阴性对照组洗脱液中的蛋白质种类,从而找到实验组中独有的蛋白质,即可能的互作蛋白。

应用领域:
        信号通路研究:寻找特定目标蛋白的互作蛋白。

技术流程:
        构建诱饵蛋白的双标载体——包装慢病毒——筛选稳转株——提取总蛋白——串联亲和纯化——洗脱液的蛋白酶解——LC-MS/MS——蛋白质定性和定量结果——筛选实验组独有蛋白

技术优点:
        1. 捕获到的是天然互作的蛋白,符合体内真实生理情况,可信度高。
        2. 采用两步纯化,能有效减少假阳性率。

参考文献:
        1.Proteomic Analysis of the Human Cyclin-dependent Kinase Family Reveals a Novel CDK5Complex Involved in Cell Growth and Migration.Mol Cell Proteomics. 13(11):2986-3000(2014).

        2.Defining the protein-protein interaction network of the human protein tyrosine phosphatase

        3.Family.Mol Cell Proteomics. 15(9):3030-44(2016).

        4.Novel interacting proteins identified by tandem affinity purification coupled to nano LC-MS/MS interact with ribosomal S6 protein kinase 4 (RSK4) and its variant protein (RSK4m). Int J BiolMacromol. 96:421-428(2017).

文章内页模板插图.jpg

版权声明

原创文章,作者:辉骏生物,作者与人人实验网是该作品合法使用者。转载请加人人实验课代表微信:renrenlab01,获取授权。违规转载法律必究。

扫码分享:

潜力人气榜
  • Top1

    如果科研看不到尽头没有结果,那还要走下去吗?

    2018-06-14 5344 72
  • 2
  • Top2

    英语,你怕了么

    2018-06-22 5322 22
  • 3
  • Top3

    原创征文 | 构建一个属于科研人的圈子 就差你一...

    2018-05-22 1569 274
  • 4
  • 4

    【现实版科研圈】之两三趣事儿

    2018-06-14 1461 52
  • 5
  • 5

    我的研究生阶段感悟

    2018-05-28 1225 49
  • 6
  • 6

    接地气的科研生活

    2018-06-01 1208 51
  • 7
  • 7

    美国冷泉港实验室无责任指南手册(一)

    2018-06-16 1001 74
  • 8
  • 8

    科研这些事

    2018-06-22 878 34
  • 9
  • 9

    我在纽约当助教系列之学弟求你别作了

    2018-06-11 732 39
  • 10
  • 10

    岩哥,雄起

    2018-06-13 701 70
  • 11 12
获奖热文

加载更多>

Copyright 2015-2017 人人实验(北京)科技有限公司 All Rights Reserved 京ICP备15058824